ClinoStar細胞培養(yǎng)系統(tǒng)技術是現(xiàn)代生物學研究的重要手段,其中細胞傳代是細胞培養(yǎng)過程中的關鍵環(huán)節(jié)。 一、原理
細胞傳代是在細胞生長達到一定密度后,通過一定的方法將細胞從原培養(yǎng)體系中分離出來,并進行再次培養(yǎng)的過程。其原理基于細胞的貼壁生長特性,即細胞在培養(yǎng)容器壁上生長,隨著時間的推移,細胞數(shù)量增加,密度增大,會因營養(yǎng)物質(zhì)耗盡和代謝產(chǎn)物積累而停止生長。為了使細胞持續(xù)生長,需進行傳代。
二、方法
消化法:在培養(yǎng)液中加入適量的酶(如胰蛋白酶),使細胞與培養(yǎng)容器壁分離,形成懸浮狀態(tài)。然后通過離心、過濾等方法將細胞收集起來,再進行二次培養(yǎng)。
刮除法:使用玻璃或塑料刮子將附著在培養(yǎng)容器壁上的細胞刮下來。此方法適用于貼壁不強的細胞。
酶-機械法:先在培養(yǎng)液中加入適量的酶,使細胞與培養(yǎng)容器壁部分分離,然后使用機械力量(如吸管或刮子)將細胞從培養(yǎng)容器壁上分離下來。
三、ClinoStar細胞培養(yǎng)系統(tǒng)的注意事項
操作前準備:確保操作環(huán)境無菌,所有器具均已消毒。同時要保證細胞的遺傳背景清楚,以便于操作過程中進行細胞的辨識和選擇。
時間掌握:傳代時間不宜過長,以免影響細胞活性。通常在細胞密度較高時進行傳代,此時細胞活力較強,生長速度快。
酶的濃度與作用時間:胰蛋白酶等酶的濃度要適中,作用時間不宜過長,以免對細胞造成損傷。
溫度控制:整個操作過程應在恒溫條件下進行,以保持細胞的正常生理狀態(tài)。
防止污染:操作過程中要嚴格遵守無菌操作規(guī)程,避免細菌、真菌、支原體等微生物的污染。同時要定期對培養(yǎng)環(huán)境和器具進行消毒。